Péptido de glutationa: estrutura, dados moleculares, certificado de análise, frasco de 750 mg

A glutationa, abreviada como GSH, é um tripéptido de ácido glutâmico, cisteína e glicina.

Foi isolada da levedura por Hopkins em 1921 e a sua estrutura foi estabelecida por síntese química em 1935. É, de longe, o pequeno tiol mais documentado na bioquímica, razão pela qual o volume de pesquisa pelo seu nome ultrapassa o de qualquer péptido sintético no catálogo.

A razão pela qual é descrita aqui como "metade de um péptido" reside na primeira ligação. Num péptido comum, cada resíduo é unido através do seu alfa-carboxilo.

Na glutationa, o ácido glutâmico liga-se à cisteína através do carboxilo da sua cadeia lateral, o gama-carboxilo, o que deixa o alfa-carboxilo livre.

O nome completo é, portanto, gama-L-glutamil-L-cisteinil-glicina, e o "gama" não é decorativo: é a ligação que as peptidases comuns não cortam e que um espectrómetro de massa reconhece por uma perda característica de 129 daltons.

O segundo ponto que a separa do resto do catálogo é a escala. O KPV, o DSIP ou o SS-31 são fabricados por síntese em fase sólida e vendidos ao miligrama.

A glutationa na escala de 750 mg é, industrialmente, um reagente cristalino obtido por fermentação e cristalização em vez de síntese, e o seu certificado reflete isso mesmo.

Apenas para investigação. Não se destina a uso humano nem veterinário.

Duas características da molécula sustentam todo o certificado.

O tiol da cisteína é o grupo que oxida no ar: duas moléculas de GSH unem-se através de um dissulfureto para dar o dímero GSSG, o dobro da massa menos dois hidrogénios.

Um frasco rotulado como "glutationa reduzida" é um frasco no qual esse tiol ainda está livre, e o certificado tem de o provar.

Os dois carboxilos (o alfa-carboxilo livre do ácido glutâmico e o carboxilo C-terminal da glicina) tornam o composto ácido e solúvel em água, e fazem do pó cristalino um zwitterion em vez de um sal.

Não existe nenhum resíduo aromático na cadeia. A 280 nm o composto é invisível; um cromatograma de glutationa é executado entre 210 e 215 nm, na própria ligação peptídica.

Cada listagem de glutationa declara uma de duas coisas, e tratam-se de reagentes diferentes.

• Glutationa reduzida (GSH), 307.3 g/mol, um tiol livre por molécula. Isto é o que o catálogo contém, e o que a abreviatura GSH designa por si só.
• Glutationa oxidada (GSSG), 612.6 g/mol, duas GSH unidas por uma ponte dissulfureto, sem tiol livre. Um número CAS diferente, uma massa diferente, um certificado diferente.

O tiol é o que torna a distinção frágil. A GSH no estado sólido, selada e seca, permanece reduzida durante anos.

A GSH em solução, exposta ao ar em pH neutro, oxida para GSSG ao longo de horas ou dias, mais rapidamente na presença de vestígios de metais. É por isso que o composto é vendido como um pó seco, por que o frasco é selado e por que uma linha de teor de tiol pertence ao certificado: um pó que tenha absorvido humidade e começado a oxidar continua a parecer branco e continua a pesar 750 mg.

O teor de tiol é medido com o reagente de Ellman (DTNB): um tiol livre liberta um anião amarelo lido a 412 nm.

Num lote fresco de glutationa reduzida, o valor situa-se em 98 % ou acima do valor teórico. Um valor de 90 % significa que um décimo do pó já é dímero.

Como a glutationa nesta escala é um reagente cristalino e não um péptido sintético liofilizado, o seu certificado tem um formato diferente dos certificados do resto do catálogo. Seis linhas sustentam-no.

• Identidade por espectrometria de massa. A molécula protonada a m/z 308.1 [M+H]⁺, frequentemente com o aduto de sódio a 330.1. Na fragmentação, a perda neutra característica de 129 daltons (o grupo piroglutamil) dá um fragmento a 179.0: essa perda é a assinatura da ligação gama, e uma molécula sem ela não é glutationa.
• Pureza por HPLC de fase reversa a 210-215 nm. O composto é muito polar e elui cedo, numa fase móvel com pouco solvente orgânico. A impureza a procurar é a GSSG, que elui mais tarde; um valor acima de 98 % é comum.
• Teor de tiol pelo método de Ellman, discutido acima, declarado face à teoria.
• Teor de água por titulação de Karl Fischer. Um pó cristalino que não é um sal não tem contra-ião a considerar, pelo que a água é a única coisa entre a massa do rótulo e a massa do composto; abaixo de 0.5 % é típico de um lote seco.
• Quiralidade. Os dois resíduos quirais são o ácido L-glutâmico e a L-cisteína; uma rotação ótica específica no certificado confirma o composto L,L.
• Número de lote, data, nome do laboratório e uma fotografia do frasco rotulado. As linhas que ligam o documento ao objeto em mãos.

Não existe uma linha de teor líquido de péptido num certificado de glutationa, e a sua ausência é correta: o teor líquido de péptido existe para contabilizar o acetato e a água de um sal liofilizado, e este composto não é nenhum dos dois.

Um certificado que imprima um foi copiado de outro produto.

Como ler cada campo e como verificar um número de relatório junto do próprio laboratório está em como ler um COA de péptido e como ler um relatório de teste Janoshik.

Os relatórios Janoshik são publicados por tamanho na biblioteca de COA à medida que chegam do laboratório.

A glutationa está listada em um tamanho, um frasco de 750 mg.

A escala é definida pela molécula: a 307 g/mol, 750 mg são 2.4 milimoles, a quantidade que permite fazer uma solução stock de concentração comum sem pesar uma fração de miligrama, e o preço por grama de um produto de fermentação torna um frasco de 10 mg sem sentido.

O cartão do catálogo no topo desta página lê os valores em tempo real do catálogo, pelo que nunca contradiz a página do produto.

A glutationa é um reagente que o catálogo armazena em lotes ocasionais em vez de continuamente: entre lotes, a página do produto glutationa mostra o tamanho como temporariamente indisponível, e uma mensagem para support@oxpeptides.com é respondida com a data do próximo lote.

Nenhum preço é prometido aqui por esse motivo; a página do produto apresenta o valor atualizado.

Os outros compostos de investigação não peptídicos do catálogo são o NAD⁺ (frascos de 500 mg e 1 g, a mesma ordem de escala) e os dois reagentes mitocondriais MOTS‑c e SS-31.

O que o preço inclui na OXpeptides: um frasco selado e rotulado, e análise em curso, relatório publicado assim que for recebido. Enviado a partir da UE, com seguimento: 9,90 €, grátis a partir de 120 €.

Ver glutationa no catálogo →

• Temperatura: −20 °C para armazenamento a longo prazo; 2 a 8 °C para períodos de algumas semanas. O pó cristalino seco é muito mais robusto do que um péptido sintético liofilizado.
• Ar e humidade: o tiol é a parte frágil. Mantenha o frasco selado e na sua caixa; deixe um frasco frio atingir a temperatura ambiente antes de sair do seu saco, para que não se forme condensação no vidro. Uma vez aberto, volte a selar em condições secas e feche o frasco prontamente.
• Prazo de validade: 24 meses para um frasco selado armazenado como acima; a data impressa no rótulo prevalece.
• Em solução: é aqui que o composto se perde. Uma solução aquosa em pH neutro oxida para GSSG em horas ou dias no ar; uma solução é feita no momento em que é necessária, mantida fria, mantida ácida onde o método o permita, e não é armazenada. Uma solução que tenha estado parada durante uma semana é uma solução de GSSG.

O envio à temperatura ambiente durante alguns dias não degrada o pó selado. As regras composto por composto estão em péptidos liofilizados: armazenamento e prazo de validade.

"Glutationa" gera um volume massivo de pesquisas mensais na Europa, e as primeiras páginas são entradas de enciclopédia, páginas de retalho para produtos que nada têm a ver com um reagente de investigação e resumos de revistas científicas.

Para um laboratório que necessite do composto cristalino, a listagem que vale a pena ler responde a cinco perguntas na própria página.

1. A forma está declarada? Reduzida (GSH, 307.3) ou oxidada (GSSG, 612.6). Uma página que escreve "glutationa" e nunca diz qual delas é, está a descrever um frasco que não viu.
2. A massa é 307.3 e o CAS 70-18-8? Qualquer outro par é um composto diferente ou uma ficha técnica copiada.
3. Existe uma linha de teor de tiol no certificado? É o único valor que distingue um lote fresco da forma reduzida de um lote que começou a oxidar na prateleira.
4. O certificado é de um laboratório independente nomeado, com um número de tarefa e chave de verificação que o laboratório confirma, uma data e uma fotografia do frasco rotulado?
5. A página descreve apenas o reagente (estrutura, massa, documentação de pureza, armazenamento), com a indicação clara de apenas para investigação? Um fornecedor que publica conteúdo sobre utilização é um fornecedor fácil de encerrar, e a encomenda em trânsito pertence ao comprador.

O método de sete pontos, incluindo o aspeto de um certificado reutilizado ou editado, está em como verificar um fornecedor de péptidos. A lista de verificação para toda a Europa está em como verificar um fornecedor de péptidos.