Peptídeo timosina alfa-1 (Tα1): sequência, fornecimento, COA, tamanhos

Thymosin alpha-1 (Tα1) é um peptídeo de 28 aminoácidos isolado pela primeira vez em 1977 a partir do timo de vitelo pelo grupo de Allan Goldstein, que fracionava extratos tímicos há uma década.

Mais tarde verificou-se que era o fragmento N-terminal de uma proteína maior, a protimosina alfa, e que transportava um grupo acetil no seu N-terminal, uma característica que importa num certificado.

A mesma sequência tem sido produzida sinteticamente desde os anos 1980 e está licenciada em vários países sob o nome comercial Zadaxin.

O que é vendido como timosina alfa-1 para investigação é o peptídeo acetilado idêntico de 28 resíduos, fabricado por síntese em fase sólida, purificado por HPLC preparativa e liofilizado. Utilização exclusiva em investigação.

Não para uso humano ou veterinário.

Três entradas de catálogo contêm a palavra "thymosin" ou "thym-", e os compradores pedem regularmente uma enquanto querem dizer outra. São três objetos diferentes.

As timosinas alfa e beta são sequências não relacionadas que foram isoladas da mesma preparação do mesmo tecido (fração timosina 5, um extrato de timo de vitelo preparado pela primeira vez nos anos 1960), que é a única razão pela qual partilham um nome.

A timalina é a fração bruta de onde foram isoladas.

Uma listagem que descreve a timosina alfa-1 com as propriedades da TB‑500, ou que atribui à timalina uma única massa molecular, confundiu os três.

O peptídeo de sete resíduos tem o seu próprio guia: Peptídeo TB‑500: sequência, COA, tamanhos.

A serina N-terminal da timosina alfa-1 transporta um grupo acetil (CH₃CO-), adicionado durante a síntese como último passo na resina. Altera três coisas que um certificado reporta.

• Massa. O acetil adiciona 42,0 daltons. Uma "thymosin alpha-1" cuja massa reconstrói para 3.066,3 em vez de 3.108,3 nunca foi acetilada e é o peptídeo des-acetilado, uma molécula diferente.
• HPLC. O peptídeo acetilado não tem amina N-terminal livre, pelo que elui ligeiramente mais tarde do que a forma des-acetilada em fase reversa. Uma acetilação incompleta aparece como um pequeno pico logo antes do principal; um lote bem fabricado mostra-o abaixo de 0,5 %.
• Estabilidade. Sem uma amina livre no N-terminal, o peptídeo não é substrato para aminopeptidases e não sofre as reações laterais N-terminais (formação de dicetopiperazina) que encurtam o prazo de validade de algumas sequências. Na prateleira é um dos peptídeos de melhor comportamento do seu tamanho.

A sequência não contém metionina, cisteína nem triptofano, pelo que a oxidação não é a preocupação que é para a sermorelin.

Os seus nove resíduos ácidos tornam-na fortemente higroscópica como sal de acetato, razão pela qual um frasco selado importa mais para este peptídeo do que para a maioria.

Pureza HPLC: um pico principal

Na HPLC de fase reversa o peptídeo elui como um único pico principal; a figura de pureza é a área desse pico em relação a todos os picos.

Acima de 99 % é a especificação para os lotes do catálogo.

As impurezas a procurar são o peptídeo des-acetilado (eluindo logo antes), sequências de deleção da síntese (uma cadeia a faltar um resíduo) e, para um peptídeo com tantos resíduos de glutamato e aspartato, subprodutos relacionados com aspartimida que eluem perto do pico principal.

Espectrometria de massa: 3.108,3

Um peptídeo deste tamanho e carga é visto por ionização por electrospray como iões com múltiplas cargas, em modo negativo tão facilmente como em positivo; o relatório lista os iões observados e a massa deconvoluída.

Para a timosina alfa-1 os valores esperados em modo positivo são aproximadamente m/z 1.037,1 para [M+3H]³⁺ e 778,1 para [M+4H]⁴⁺, ambos reconstruindo para 3.108,3. Uma deconvoluída de 3.066 é a forma des-acetilada.

Teor líquido de peptídeo, água, endotoxina

O teor líquido (por análise de aminoácidos ou UV) indica quantos dos miligramas rotulados são peptídeo; com apenas quatro resíduos básicos para transportar contra-íões de acetato, 85 a 90 % é típico para esta sequência, superior ao de um peptídeo básico.

A água (Karl Fischer) é tipicamente 3 a 8 % num bolo liofilizado e sobe rapidamente num frasco aberto deste sal higroscópico.

A endotoxina (LAL, em UE/mg) indica se a água e o vidro do enchimento estavam limpos.

O que mais deve estar na página

• O nome do laboratório e um número de ensaio verificável (Janoshik Analytical é a referência neste mercado).
• O número de lote, idêntico ao impresso no frasco.
• A data do ensaio e uma fotografia do frasco ensaiado com o rótulo do fornecedor. Um certificado para um frasco de fabricante nu não diz nada sobre o produto acabado.

Os certificados da OXpeptides são publicados por lote na biblioteca de COA e na página do produto timosina alfa-1 à medida que cada lote regressa do laboratório. O método campo a campo está em como ler um COA de peptídeo.

A timosina alfa-1 está em stock num único tamanho, 10 mg: 10 mg de um peptídeo de 3,1 kDa são 3,2 micromoles.

O cartão do catálogo no topo desta página mostra o preço em tempo real. Aplicam-se escalões de volume a partir de dois frascos (−5 % a partir de 2, −8 % a partir de 3), e o preço de subscrição aplica-se a todas as entregas.

O que o preço inclui na OXpeptides: um frasco selado e rotulado de um lote testado, o seu COA de lote e uma substituição se a encomenda chegar perdida ou danificada.

Expedido a partir de França (UE), com seguimento: $19, gratuito a partir de $150.

Ver timosina alfa-1 no catálogo →

• Temperatura: −20 °C para armazenamento a longo prazo; um frigorífico (2 a 8 °C) durante algumas semanas.
• Humidade: o ponto a vigiar para este peptídeo. Nove resíduos ácidos tornam o sal de acetato fortemente higroscópico; mantenha o frasco selado e na sua caixa, e deixe um frasco frio atingir a temperatura ambiente antes de sair do seu saco para que não condense água no vidro.
• Luz e oxigénio: sem resíduo oxidável na sequência; a caixa fechada habitual é suficiente.
• Prazo de validade: 24 meses para um frasco liofilizado selado armazenado a frio; a data no rótulo rege.

Alguns dias de transporte ambiente não degradam o pó selado. As regras compostas por composto estão em peptídeos liofilizados: armazenamento e prazo de validade.

"Thymosin alpha 1" devolve páginas enciclopédicas, artigos de revistas e clínicas antes de devolver um fornecedor de investigação.

Para um laboratório que necessita do reagente, a listagem que importa responde a cinco perguntas na própria página.

1. É a molécula correta? 28 resíduos, acetilada, 3,108.3 g/mol. Não TB‑500 (889), não Thymalin (uma mistura).
2. Existe um lote COA de um laboratório independente nomeado, verificável no site do laboratório, com pureza HPLC, a massa de 3,108.3 e o conteúdo peptídico líquido?
3. O COA mostra o frasco etiquetado do próprio fornecedor, e o seu número de lote corresponde ao frasco que recebe?
4. O frasco é expedido a partir de stock doméstico, com seguimento, em poucos dias? O catálogo é expedido a partir de França (UE) para a Europa.
5. A página descreve apenas o reagente (sequência, documentação de pureza, armazenamento), com "Utilização exclusiva em investigação. Não para uso humano ou veterinário." declarado claramente? Um fornecedor que publica conteúdo de utilização é um fornecedor que é fácil de encerrar, e esse risco recai sobre o comprador cuja encomenda está em trânsito.

O método de sete pontos encontra-se em como verificar um fornecedor de péptidos; a lista de verificação para a UE em onde comprar péptidos de investigação na UE.