GHK‑Cu vs AHK‑Cu: os dois tripeptídeos de cobre comparados, átomo por átomo

Alinhar as duas sequências e a diferença é um único carbono.

• GHK = glicil-L-histidil-L-lisina. A glicina, o primeiro resíduo, tem um hidrogénio como cadeia lateral.
• AHK = L-alanil-L-histidil-L-lisina. A alanina tem um grupo metilo (CH₃) onde a glicina tem um hidrogénio.

Esse grupo metilo adiciona 14 Da (CH₂) à massa e introduz um centro quiral no primeiro resíduo.

Tudo o resto é idêntico: a histidina no meio, cujo anel imidazol é o que liga o cobre, e a lisina no final. Cada tripeptídeo é então complexado com um ião de cobre(II) para dar GHK‑Cu e AHK‑Cu.

GHK foi isolado do plasma em 1973 por Loren Pickart, razão pela qual tem cinquenta anos de química por trás.

AHK é um análogo sintético que apareceu na literatura de ingredientes cosméticos nos anos 2000. Ambos são feitos hoje por síntese em fase sólida; nenhum é extraído de nada. Utilização exclusiva em investigação.

Não para uso humano ou veterinário.

A linha do teor de cobre vale uma segunda análise. Em ambos os complexos um único átomo de cobre (63.5 g/mol) representa cerca de um sexto da massa.

Um frasco de "100 mg GHK‑Cu" contém portanto cerca de 16 mg de cobre e 84 mg de peptídeo; uma listagem que cita a massa do tripeptídeo sem cobre para um complexo de cobre errou em 16 %.

O ião de cobre(II) em GHK‑Cu é ligado por três átomos do peptídeo: o nitrogénio da amina N-terminal (na glicina), o nitrogénio desprotonado da primeira ligação peptídica e um nitrogénio do anel imidazol da histidina.

Um quarto sítio no cobre é ocupado por água ou, em concentração mais elevada, por uma segunda molécula de GHK.

A geometria é quadrado-planar em torno do cobre, que é o arranjo que dá aos complexos de peptídeo de cobre(II) a sua cor azul-violeta.

AHK‑Cu liga cobre através dos mesmos três nitrogénios.

O grupo metilo da alanina fica no carbono junto à amina N-terminal, fora do plano de coordenação, por isso altera o ambiente imediato do cobre sem alterar quais átomos o ligam. Duas consequências são mensuráveis:

• A cor é a mesma. Ambos os pós são azul-violeta, ambas as soluções são azuis. Nada num banco distingue-os à vista.
• A massa é diferente. Num espectro de massa os iões do tripeptídeo livre aparecem em 341.2 (GHK, M+H⁺) e 355.2 (AHK, M+H⁺); o cobre dissocia-se sob a ionização habitual, por isso o certificado reporta a massa do peptídeo e o intervalo de 14 Da é a verificação de identidade.

Ambos os complexos são estáveis como sólidos secos mas sensíveis ao oxigénio e à luz durante longos períodos em solução, razão pela qual a linha de armazenamento de ambas as entradas do catálogo adiciona "oxigénio" ao habitual "luz e humidade".

Porque os dois parecem idênticos, o certificado de análise é o único documento que diz a um comprador qual está no frasco. Três linhas fazem o trabalho.

Tempo de retenção

Numa coluna HPLC de fase inversa o grupo metilo extra torna AHK ligeiramente mais hidrofóbico, por isso AHK‑Cu elui um pouco mais tarde que GHK‑Cu sob o mesmo gradiente.

Por si só, esse desvio é demasiado pequeno para identificar um composto; torna-se útil quando o laboratório já correu ambos os padrões e é a razão pela qual um fornecedor que lista ambos deve mostrar um cromatograma separado para cada um.

Confirmação de massa

A linha decisiva.

Uma massa observada consistente com 340.4 (ou um M+H⁺ em 341.2) significa GHK; 354.4 (M+H⁺ em 355.2) significa AHK.

Um certificado que mostra a massa de GHK num frasco de AHK‑Cu testou o composto errado ou o frasco contém o composto errado.

Ensaio de cobre

Os melhores certificados adicionam uma determinação de cobre (por ICP ou método colorimétrico) e reportam-na contra o teórico 15 a 16 %.

Uma leitura de cobre muito abaixo disso significa que o frasco contém o tripeptídeo livre ou um complexo feito com cobre a menos e a cor azul será mais fraca do que o esperado.

Poucos laboratórios incluem esta linha por defeito; peça-a numa encomenda grande.

Os certificados da OXpeptides são publicados por lote na biblioteca de COA.

Os campos restantes (laboratório, número de teste verificável, lote, data, foto do frasco etiquetado) são os mesmos para cada peptídeo e são lidos em como ler um COA de peptídeo; o que a percentagem HPLC diz e não diz está em pureza HPLC: o que 99 % significa.

Esta é a maior diferença prática entre os dois reagentes, e é um facto sobre documentação, não sobre as moléculas.

GHK‑Cu foi caracterizado desde 1973.

A sua estrutura cristalina, as suas constantes de ligação ao cobre, o seu comportamento em modelos de células cultivadas e em ecrãs de expressão genética (o Connectivity Map do Broad Institute, onde aparece pelo nome) estão publicados, revistos e re-revistos.

A revisão de 2018 de Pickart e Margolina, listada abaixo, é o ponto de entrada padrão.

AHK‑Cu tem alguns artigos primários, a maioria do lado dos ingredientes cosméticos e a maioria em modelos de células cultivadas, dos quais Shin et al. (2019) é o que o estuda pelo nome ao lado de GHK‑Cu.

Não existe uma revisão dedicada a ele.

Um laboratório que precisa de um reagente com uma linha de base publicada profunda escolhe GHK‑Cu; um que estuda o próprio análogo escolhe AHK‑Cu, e geralmente encomenda ambos para os correr lado a lado.

O que um comprador retira disso: qualquer listagem que descreva AHK‑Cu com a literatura de GHK‑Cu está a pedir emprestado.

Os dois compostos estão separados por um grupo metilo em estrutura e por algumas centenas de artigos em documentação.

O catálogo oferece ambos como pós liofilizados em frascos de borossilicato de 3 mL selados com septo de bromobutil e cápsula de crimpagem:

GHK‑Cu vem em frascos maiores porque é produzido em escala industrial e custa menos por miligrama para fabricar; AHK‑Cu é uma síntese de volume menor e começa em 50 mg.

Os preços em tempo real, por frasco e por miligrama, estão nas duas páginas de produto, e as questões do lado da compra (verificações de fornecedor, o que o preço inclui) estão em o guia de compra de GHK‑Cu e o guia de compra de AHK‑Cu.

"Peptídeo de cobre" num mercado pode significar qualquer um dos compostos, uma mistura dos dois, o tripeptídeo sem cobre ou um creme contendo uma fração de um por cento de um deles. Quatro perguntas resolvem-no:

1. A sequência está escrita? Gly-His-Lys ou Ala-His-Lys. "Peptídeo de cobre" sozinho é uma categoria, não um composto.
2. A massa no certificado é a correta? 340.4 para GHK, 354.4 para AHK, num relatório de um laboratório nomeado que pode ser consultado.
3. O pó é azul-violeta e a quantidade está indicada em miligramas? Um pó branco não é um complexo de cobre; uma listagem em onças fluidas é um cosmético.
4. A página descreve apenas o reagente? Composição, documentação de pureza, armazenamento, "utilização exclusiva em investigação". Uma página que descreve qualquer outra coisa é uma página que pode ser retirada com uma encomenda em trânsito.

O método completo de sete pontos está em como verificar um fornecedor de peptídeos.