GHK-Cu vs AHK-Cu: os dois tripeptídeos de cobre comparados, átomo por átomo

Alinhar as duas sequências e a diferença é um único carbono.

• GHK = glicil-L-histidil-L-lisina. A glicina, o primeiro resíduo, tem um hidrogénio como cadeia lateral.
• AHK = L-alanil-L-histidil-L-lisina. A alanina tem um grupo metilo (CH₃) onde a glicina tem um hidrogénio.

Esse grupo metilo adiciona 14 Da (CH₂) à massa e introduz um centro quiral no primeiro resíduo.

Tudo o resto é idêntico: a histidina no meio, cujo anel imidazol é o que liga o cobre, e a lisina no final. Cada tripeptídeo é então complexado com um ião de cobre(II) para dar GHK-Cu e AHK-Cu.

GHK foi isolado do plasma em 1973 por Loren Pickart, razão pela qual tem cinquenta anos de química por trás.

AHK é um análogo sintético que apareceu na literatura de ingredientes cosméticos nos anos 2000. Ambos são feitos hoje por síntese em fase sólida; nenhum é extraído de nada. Apenas para investigação.

Não se destina a uso humano nem veterinário.

A diferença está toda no primeiro resíduo. No GHK-Cu é uma glicina, o aminoácido mais simples, com um átomo de hidrogénio como cadeia lateral. No AHK-Cu é uma alanina, com um grupo metilo (-CH₃) no mesmo lugar.

A histidina e a lisina, que seguram o ião de cobre, são as mesmas nas duas moléculas. Daí os 14 Da de diferença entre 403,9 e 417,9 g/mol, uma diferença pequena que a espectrometria de massa resolve sem dificuldade.

A linha do teor de cobre vale uma segunda análise. Em ambos os complexos um único átomo de cobre (63,5 g/mol) representa cerca de um sexto da massa.

Um frasco de "100 mg GHK-Cu" contém portanto cerca de 16 mg de cobre e 84 mg de peptídeo; uma listagem que cita a massa do tripeptídeo sem cobre para um complexo de cobre errou em 16 %.

O ião de cobre(II) em GHK-Cu é ligado por três átomos do peptídeo: o nitrogénio da amina N-terminal (na glicina), o nitrogénio desprotonado da primeira ligação peptídica e um nitrogénio do anel imidazol da histidina.

Um quarto sítio no cobre é ocupado por água ou, em concentração mais elevada, por uma segunda molécula de GHK.

A geometria é quadrado-planar em torno do cobre, que é o arranjo que dá aos complexos de peptídeo de cobre(II) a sua cor azul-violeta.

AHK-Cu liga cobre através dos mesmos três nitrogénios.

O grupo metilo da alanina fica no carbono junto à amina N-terminal, fora do plano de coordenação, por isso altera o ambiente imediato do cobre sem alterar quais átomos o ligam. Duas consequências são mensuráveis:

• A cor é a mesma. Ambos os pós são azul-violeta, ambas as soluções são azuis. Nada num banco distingue-os à vista.
• A massa é diferente. Os iões do tripeptídeo livre aparecem em 341,2 (GHK, M+H⁺) e 355,2 (AHK, M+H⁺); o cobre dissocia-se sob a ionização habitual, por isso o intervalo de 14 Da é a verificação de identidade.

Ambos os complexos são estáveis como sólidos secos mas sensíveis ao oxigénio e à luz durante longos períodos em solução, razão pela qual a linha de armazenamento de ambas as entradas do catálogo adiciona "oxigénio" ao habitual "luz e humidade".

Porque os dois parecem idênticos, são o rótulo e a massa molecular que dizem a um comprador qual está no frasco.

Alguns laboratórios oferecem ainda espectrometria de massa ou um cromatograma impresso como opção, mas não são um requisito.

Tempo de retenção

Numa coluna HPLC de fase inversa o grupo metilo extra torna AHK ligeiramente mais hidrofóbico, por isso AHK-Cu elui um pouco mais tarde que GHK-Cu sob o mesmo gradiente.

Por si só, esse desvio é demasiado pequeno para identificar um composto; torna-se útil quando o laboratório já correu ambos os padrões.

Identidade

Uma massa consistente com 340,4 (ou um M+H⁺ em 341,2) significa GHK; 354,4 (M+H⁺ em 355,2) significa AHK. Um relatório que mostra a massa de GHK num frasco de AHK-Cu testou o composto errado ou o frasco contém o composto errado.

Ensaio de cobre

Os melhores relatórios adicionam uma determinação de cobre (por ICP ou método colorimétrico) e reportam-na contra o teórico 15 a 16 %.

Uma leitura de cobre muito abaixo disso significa que o frasco contém o tripeptídeo livre ou um complexo feito com cobre a menos e a cor azul será mais fraca do que o esperado.

Poucos laboratórios incluem esta linha por defeito; peça-a numa encomenda grande.

Os relatórios Janoshik da OXpeptides, do GHK-Cu de 100 mg e da retatrutida de 10, 20 e 30 mg, estão reunidos na biblioteca de COA.

Os campos restantes (laboratório, número de teste verificável, lote, data, foto do frasco etiquetado) são os mesmos para cada peptídeo e são lidos em como ler um COA de peptídeo; o que a percentagem HPLC diz e não diz está em pureza HPLC: o que 99 % significa.

Para aprofundar: Peptídeo KPV: o que é, como é fornecido.

Na prática, um relatório de GHK-Cu e um de AHK-Cu leem-se da mesma maneira: a identidade confirmada pela massa, a pureza HPLC do pico principal, a quantidade no frasco. O ponto delicado é o cobre.

A fase móvel ácida da maioria dos métodos de HPLC pode libertar o ião, por isso um relatório pode indicar a massa do tripeptídeo livre (340,4 g/mol para o GHK, 354,4 g/mol para o AHK) em vez da do complexo.

Não é um erro, desde que o relatório o diga. O GHK-Cu de 100 mg da OXpeptides tem um relatório Janoshik publicado (tarefa #217016, pureza HPLC de 99,603 %), verificável no site do laboratório.

Esta é a maior diferença prática entre os dois reagentes, e é um facto sobre documentação, não sobre as moléculas.

GHK-Cu foi caracterizado desde 1973.

A sua estrutura cristalina, as suas constantes de ligação ao cobre, o seu comportamento em modelos de células cultivadas e em ecrãs de expressão genética (o Connectivity Map do Broad Institute, onde aparece pelo nome) estão publicados, revistos e re-revistos.

A revisão de 2018 de Pickart e Margolina, listada abaixo, é o ponto de entrada padrão.

AHK-Cu tem alguns artigos primários, a maioria do lado dos ingredientes cosméticos e a maioria em modelos de células cultivadas, dos quais Shin et al. (2019) é o que o estuda pelo nome ao lado de GHK-Cu.

Não existe uma revisão dedicada a ele.

Um laboratório que precisa de um reagente com uma linha de base publicada profunda escolhe GHK-Cu; um que estuda o próprio análogo escolhe AHK-Cu, e geralmente encomenda ambos para os correr lado a lado.

O que um comprador retira disso: qualquer listagem que descreva AHK-Cu com a literatura de GHK-Cu está a pedir emprestado.

Os dois compostos estão separados por um grupo metilo em estrutura e por algumas centenas de artigos em documentação.

O catálogo oferece ambos como pós liofilizados em frascos de borossilicato de 3 mL selados com septo de bromobutil e cápsula de crimpagem:

GHK-Cu vem num frasco de 100 mg porque é produzido em escala industrial e custa menos por miligrama para fabricar; AHK-Cu é uma síntese de volume menor e começa em 50 mg.

Os preços em tempo real, por frasco e por miligrama, estão nas duas páginas de produto, e as questões do lado da compra (verificações de fornecedor, o que o preço inclui) estão em o guia de compra de GHK-Cu e o guia de compra de AHK-Cu.

Para aprofundar: KLOW: composição do frasco de 80 mg e Mistura peptídica GLOW.

"Peptídeo de cobre" num mercado pode significar qualquer um dos compostos, uma mistura dos dois, o tripeptídeo sem cobre ou um creme contendo uma fração de um por cento de um deles. Quatro perguntas resolvem-no:

1. A sequência está escrita? Gly-His-Lys ou Ala-His-Lys. "Peptídeo de cobre" sozinho é uma categoria, não um composto.
2. A massa declarada é a correta? 340,4 para GHK, 354,4 para AHK (tripeptídeo livre), com a pureza HPLC indicada.
3. O pó é azul-violeta e a quantidade está indicada em miligramas? Um pó branco não é um complexo de cobre; uma listagem em mililitros é um cosmético.
4. A página descreve apenas o reagente? Composição, documentação de pureza, armazenamento, "apenas para investigação". Uma página que descreve qualquer outra coisa é uma página que pode ser retirada com uma encomenda em trânsito.

O método completo de sete pontos está em como verificar um fornecedor de peptídeos.

Três perguntas bastam diante de uma listagem: o nome do composto é preciso (GHK-Cu ou AHK-Cu, não «peptídeo de cobre»)?

A massa declarada corresponde a esse composto? A quantidade em mg está impressa no frasco? Uma listagem que responde às três permite comparar o preço por mg; as outras não.