GHK‑Cu vs AHK‑Cu: de twee koper-tripeptiden vergeleken, atoom voor atoom

Zet de twee sequenties naast elkaar en het verschil is een enkel koolstofatoom.

• GHK = glycyl-L-histidyl-L-lysine. Glycine, het eerste residu, heeft een waterstof als zijketen.
• AHK = L-alanyl-L-histidyl-L-lysine. Alanine heeft een methylgroep (CH₃) waar glycine een waterstof heeft.

Die methylgroep voegt 14 Da (CH₂) toe aan de massa en introduceert een chiraal centrum bij het eerste residu.

Alles anders is identiek: de histidine in het midden, waarvan de imidazoolring koper bindt, en de lysine aan het einde. Elk tripeptide wordt vervolgens gecomplexeerd met één koper(II)-ion om GHK‑Cu en AHK‑Cu te geven.

GHK werd in 1973 uit plasma geïsoleerd door Loren Pickart, daarom heeft het vijftig jaar chemie achter zich.

AHK is een synthetisch analoog dat in de literatuur over cosmetische ingrediënten in de jaren 2000 verscheen. Beide worden vandaag gemaakt door vastfase-synthese; geen van beide wordt uit iets geëxtraheerd.

Alleen voor onderzoeksgebruik. Niet voor humaan of veterinair gebruik.

De kopergehalte-lijn is een tweede blik waard. In beide complexen is één koperatoom (63.5 g/mol) verantwoordelijk voor ongeveer een zesde van de massa.

Een "100 mg GHK‑Cu" vial bevat daarom ongeveer 16 mg koper en 84 mg peptide; een vermelding die de koper-vrije tripeptidemassa voor een kopercomplex citeert, heeft 16 % verkeerd geteld.

Het koper(II)-ion in GHK‑Cu wordt gebonden door drie atomen van het peptide: de stikstof van de N-terminale amine (op glycine), de gedeprotoneerde stikstof van de eerste peptidebinding, en een stikstof van de histidine imidazoolring.

Een vierde plaats op het koper wordt ingenomen door water of, bij hogere concentratie, door een tweede GHK-molecuul.

De geometrie is vierkant-planair rond het koper, wat de rangschikking is die koper(II)-peptidecomplexen hun blauw-violette kleur geeft.

AHK‑Cu bindt koper via dezelfde drie stikstoffen.

De methylgroep van alanine zit op de koolstof naast de N-terminale amine, buiten het coördinatievlak, dus verandert het de directe omgeving van het koper zonder te veranderen welke atomen het binden. Twee gevolgen zijn meetbaar:

• De kleur is hetzelfde. Beide poeders zijn blauw-violet, beide oplossingen zijn blauw. Niets op een werkbank onderscheidt ze met het blote oog.
• De massa is verschillend. Op een massaspectrum verschijnen de vrije tripeptide-ionen op 341.2 (GHK, M+H⁺) en 355.2 (AHK, M+H⁺); het koper dissocieert onder de gebruikelijke ionisatie, dus het certificaat rapporteert de peptidemassa, en de 14 Da kloof is de identiteitscontrole.

Beide complexen zijn stabiel als droge vaste stoffen maar gevoelig voor zuurstof en licht over lange perioden in oplossing, daarom voegt de opslaglijn van beide catalogusvermeldingen "zuurstof" toe aan de gebruikelijke "licht en vocht".

Omdat de twee er identiek uitzien, is het certificaat van analyse het enige document dat een koper vertelt welke in de vial zit. Drie lijnen doen het werk.

Retentietijd

Op een omgekeerde-fase HPLC-kolom maakt de extra methylgroep AHK iets hydrofober, dus elueert AHK‑Cu iets later dan GHK‑Cu onder dezelfde gradiënt.

Op zichzelf is die verschuiving te klein om een verbinding te identificeren; het wordt nuttig wanneer het laboratorium beide standaarden heeft gerund, en het is de reden dat een leverancier die beide vermeldt een apart chromatogram voor elk moet tonen.

Massabevestiging

De beslissende lijn. Een waargenomen massa consistent met 340.4 (of een M+H⁺ op 341.2) betekent GHK; 354.4 (M+H⁺ op 355.2) betekent AHK.

Een certificaat dat de GHK-massa toont op een AHK‑Cu vial heeft de verkeerde verbinding getest, of de vial bevat de verkeerde verbinding.

Koperassay

De beste certificaten voegen een koperbepaling toe (door ICP of een colorimetrische methode) en rapporteren het tegen de theoretische 15 tot 16 %.

Een koperlezing ver onder dat betekent dat de vial het vrije tripeptide bevat, of een complex gemaakt met te weinig koper, en de blauwe kleur zal zwakker zijn dan verwacht.

Weinig laboratoria nemen deze lijn standaard op; vraag ernaar bij een grote bestelling.

De OXpeptides certificaten worden per lot gepubliceerd in de COA-bibliotheek.

De overige velden (laboratorium, verifieerbaar testnummer, lot, datum, foto van de gelabelde vial) zijn hetzelfde voor elk peptide en worden gelezen in hoe een peptide COA te lezen; wat het HPLC-percentage wel en niet zegt staat in HPLC-zuiverheid: wat 99 % betekent.

Dit is het grootste praktische verschil tussen de twee reagentia, en het is een feit over documentatie, niet over de moleculen.

GHK‑Cu is gekarakteriseerd sinds 1973.

De kristalstructuur, de koperbindingsconstanten, het gedrag in gekweekte-celmodellen en in gen-expressieschermen (de Broad Institute Connectivity Map, waar het bij naam verschijnt) zijn gepubliceerd, beoordeeld en herbeoordeeld.

Pickart en Margolina's 2018 review, hieronder vermeld, is het standaard startpunt.

AHK‑Cu heeft een handvol primaire papers, meestal van de kant van cosmetische ingrediënten en meestal in gekweekte-celmodellen, waarvan Shin et al. (2019) degene is die het bij naam naast GHK‑Cu bestudeert.

Er is geen review eraan gewijd.

Een laboratorium dat een reagens met een diepe gepubliceerde basislijn nodig heeft, kiest GHK‑Cu; een laboratorium dat het analoog zelf bestudeert, kiest AHK‑Cu en bestelt meestal beide om ze naast elkaar te draaien.

Wat een koper daarvan meeneemt: elke vermelding die AHK‑Cu beschrijft met de literatuur van GHK‑Cu leent. De twee verbindingen zijn één methylgroep uit elkaar in structuur en een paar honderd papers uit elkaar in documentatie.

De catalogus biedt beide aan als gelyofiliseerde poeders in verzegelde 3 mL borosilicaatvials met een bromobutylseptum en crimp cap:

GHK‑Cu komt in grotere vials omdat het op industriële schaal wordt geproduceerd en minder per milligram kost om te maken; AHK‑Cu is een synthese met kleiner volume en begint bij 50 mg.

De actuele prijzen, per vial en per milligram, staan op de twee productpagina's, en de koopgerelateerde vragen (leverancierscontroles, wat de prijs omvat) staan in de GHK‑Cu koopgids en de AHK‑Cu koopgids.

"Koperpeptide" op een marktplaats kan elk van beide verbindingen betekenen, een mengsel van de twee, het koper-vrije tripeptide, of een crème met een fractie van een procent van een ervan. Vier vragen regelen het:

1. Is de sequentie uitgeschreven? Gly-His-Lys of Ala-His-Lys. "Koperpeptide" alleen is een categorie, geen verbinding.
2. Is de massa op het certificaat de juiste? 340.4 voor GHK, 354.4 voor AHK, op een rapport van een benoemd laboratorium dat kan worden opgezocht.
3. Is het poeder blauw-violet, en is de hoeveelheid vermeld in milligrammen? Een wit poeder is geen kopercomplex; een vermelding in fluid ounces is een cosmetisch product.
4. Beschrijft de pagina alleen het reagens? Samenstelling, zuiverheidsdocumentatie, opslag, "Alleen voor onderzoeksgebruik. Niet voor humaan of veterinair gebruik." Een pagina die iets anders beschrijft is een pagina die kan worden verwijderd met een bestelling onderweg.

De volledige zevenpuntmethode staat in hoe een peptideleverancier te controleren.