GHK‑Cu vs AHK‑Cu: kahden kuparitripeptidin vertailu atomi atomilta

Kahden sekvenssin rinnastus paljastaa eron yhdessä hiilessä.

• GHK = glysyyl-L-histidyyli-L-lysiini. Glysiinillä, ensimmäisellä tähteellä, on sivuketjussaan vety.
• AHK = L-alanyyli-L-histidyyli-L-lysiini. Alaniinilla on metyyliryhmä (CH₃) siellä missä glysiinillä on vety.

Tämä metyyliryhmä lisää massaan 14 Da (CH₂) ja tuo kiraalikeskuksen ensimmäiseen tähteeseen.

Kaikki muu on identtistä: keskellä histidiini, jonka imidatsolirengas sitoo kuparin, ja lopussa lysiini. Kumpikin tripeptidi kompleksoidaan yhden kupari(II)-ionin kanssa, jolloin syntyvät GHK‑Cu ja AHK‑Cu.

GHK eristettiin plasmasta vuonna 1973 Loren Pickartin toimesta, minkä vuoksi sillä on viidenkymmenen vuoden kemia takanaan.

AHK on synteettinen analogi, joka ilmestyi kosmeettisten ainesosien kirjallisuuteen 2000-luvulla. Molemmat valmistetaan nykyään kiinteäfaasisynteesillä; kumpaakaan ei uuteta mistään. Vain tutkimuskäyttöön.

Ei ihmis- eikä eläinkäyttöön.

Kuparipitoisuuden rivi ansaitsee toisen tarkastelun. Molemmissa komplekseissa yksi kupariatomi (63,5 g/mol) vastaa noin kuudesosaa massasta.

Siksi "100 mg GHK‑Cu"-fiola sisältää noin 16 mg kuparia ja 84 mg peptidiä; luettelo, joka ilmoittaa kuparittoman tripeptidin massan kuparikompleksille, on laskenut 16 % väärin.

Kupari(II)-ioni GHK‑Cu:ssa sitoutuu peptidin kolmeen atomiin: N-terminaalisen amiinin typpeen (glysiinissä), deprotonoituneeseen ensimmäisen peptidisidoksen typpeen ja histidiinin imidatsolirenkaan typpeen.

Kuparin neljäs kohta on varattu vedelle tai korkeammassa pitoisuudessa toiselle GHK-molekyylille.

Geometria on neliöplanäärinen kuparin ympärillä, mikä on järjestely, joka antaa kupari(II)-peptidikomplekseille niiden siniviolettin värin.

AHK‑Cu sitoo kuparin samoilla kolmella typellä.

Alaniinin metyyliryhmä sijaitsee hiilessä N-terminaalisen amiinin vieressä, koordinaatiotason ulkopuolella, joten se muuttaa kuparin välitöntä ympäristöä muuttamatta sitovia atomeja. Kaksi seurausta on mitattavissa:

• Väri on sama. Molemmat jauheet ovat siniviolettia, molemmat liuokset sinisiä. Mikään penkillä ei erota niitä silmämääräisesti.
• Massa on erilainen. Massaspektrissä vapaat tripeptidi-ionit näkyvät arvoissa 341,2 (GHK, M+H⁺) ja 355,2 (AHK, M+H⁺); kupari dissosioituu tavanomaisessa ionisaatiossa, joten todistus ilmoittaa peptidin massan ja 14 Da:n ero on identiteettitarkistus.

Molemmat kompleksit ovat stabiileja kuivina kiinteinä aineina mutta herkkiä hapelle ja valolle pitkiä aikoja liuoksessa, minkä vuoksi molempien katalogimerkintöjen säilytysrivi lisää "hapen" tavalliseen "valoon ja kosteuteen".

Koska nämä kaksi näyttävät identtisiltä, analyysitodistus on ainoa asiakirja, joka kertoo ostajalle, kumpi niistä on fiolassa. Kolme riviä hoitavat työn.

Retentioaika

Käänteisfaasi-HPLC-kolonnissa ylimääräinen metyyliryhmä tekee AHK:sta hieman hydrofobisemman, joten AHK‑Cu eluoituu hieman myöhemmin kuin GHK‑Cu samassa gradientissa.

Pelkästään tämä siirtymä on liian pieni yhdisteen tunnistamiseksi; siitä tulee hyödyllinen, kun laboratorio on ajanut molemmat standardit, ja se on syy siihen, miksi toimittajan, joka listaa molemmat, on näytettävä erillinen kromatogrammi kummallekin.

Massan vahvistus

Ratkaisva rivi.

Havaittu massa, joka vastaa arvoa 340.4 (tai M+H⁺ arvolla 341.2), tarkoittaa GHK:ta; 354.4 (M+H⁺ arvolla 355.2) tarkoittaa AHK:ta.

Todistus, joka näyttää GHK-massan AHK‑Cu-fiolassa, on testannut väärän yhdisteen tai fiola sisältää väärän yhdisteen.

Kuparimääritys

Parhaat todistukset sisältävät kuparimäärityksen (ICP:llä tai kolorimetrisellä menetelmällä) ja raportoivat sen teoreettista 15–16 % vastaan.

Kuparilukema selvästi alle tämän tarkoittaa, että fiola sisältää vapaata tripeptidiä tai kompleksin, jossa on liian vähän kuparia, ja sininen väri on odotettua heikompi.

Harvat laboratoriot sisällyttävät tämän rivin oletuksena; pyydä se suurella tilauksella.

OXpeptides-todistukset julkaistaan eräkohtaisesti COA-kirjastossa.

Jäljellä olevat kentät (laboratorio, todennettavissa oleva testinumero, erä, päivämäärä, valokuva etiketöidystä fiolasta) ovat samat jokaiselle peptidille ja luetaan miten peptidin COA luetaan; mitä HPLC-prosentti sanoo ja ei sano, on HPLC-puhtaus: mitä 99 % tarkoittaa.

Tämä on suurin käytännön ero kahden reagenssin välillä, ja se on tosiasia dokumentaatiosta, ei molekyyleistä.

GHK‑Cu:ta on karakterisoitu vuodesta 1973.

Sen kiderakenne, kuparisitoutumiskonstantit, käyttäytyminen viljellyissä solumalleissa ja geeniekspressiotesteissä (Broad Institute Connectivity Map, jossa se esiintyy nimellä) on julkaistu, arvioitu ja uudelleenarvioitu.

Pickartin ja Margolinan vuoden 2018 katsaus, joka on lueteltu alla, on standardi lähtökohta.

AHK‑Cu:lla on muutama ensisijainen artikkeli, enimmäkseen kosmeettisten ainesosien puolelta ja enimmäkseen viljellyissä solumalleissa, joista Shin et al. (2019) on se, joka tutkii sitä nimeltä GHK‑Cu:n rinnalla.

Sille ei ole omistettu katsausta. Laboratorio, joka tarvitsee reagenssin syvällä julkaistulla perustasolla, valitsee GHK‑Cu:n; se, joka tutkii analogia itse, valitsee AHK‑Cu:n ja yleensä tilaa molemmat ajaakseen ne rinnakkain.

Mitä ostaja tästä ottaa: mikä tahansa luettelo, joka kuvailee AHK‑Cu:ta GHK‑Cu:n kirjallisuudella, lainaa. Kaksi yhdistettä ovat rakenteessa yksi metyyliryhmä erillään ja dokumentaatiossa muutama sata artikkelia erillään.

Luettelo tarjoaa molemmat lyofilisoituina jauheina suljetuissa 3 ml borosilikaattifioloissa bromobutyyliseptumilla ja puristuskuorella:

GHK‑Cu tulee suuremmissa fioloissa koska sitä valmistetaan teollisessa mittakaavassa ja se maksaa vähemmän milligrammaa kohden valmistaa; AHK‑Cu on pienemmän volyymin synteesi ja alkaa 50 mg:sta.

Live-hinnat, per fiola ja per milligramma, ovat kahdella tuotesivulla, ja ostopuolen kysymykset (toimittajan tarkistukset, mitä hinta sisältää) ovat GHK‑Cu osto-oppaassa ja AHK‑Cu osto-oppaassa.

"Kuparipetidi" markkinapaikalla voi tarkoittaa jompaa kumpaa yhdistettä, niiden seosta, kuparittomaa tripeptidiä tai voidetta, joka sisältää prosentin murto-osan yhdestä niistä. Neljä kysymystä ratkaisee sen:

1. Onko sekvenssi kirjoitettu auki? Gly-His-Lys tai Ala-His-Lys. "Kuparipetidi" yksin on kategoria, ei yhdiste.
2. Onko todistuksessa oikea massa? 340,4 GHK:lle, 354,4 AHK:lle, nimeltä mainitun laboratorion raportissa, joka voidaan tarkistaa.
3. Onko jauhe sinivioletti ja määrä ilmoitettu milligrammoina? Valkoinen jauhe ei ole kuparikompleksi; nesteunssina ilmoitettu luettelo on kosmeettinen.
4. Kuvaileeko sivu vain reagenssia? Koostumus, puhtausdokumentaatio, säilytys, "vain tutkimuskäyttöön". Sivu, joka kuvailee mitään muuta, on sivu, joka voidaan poistaa tilauksen ollessa matkalla.

Täydellinen seitsemän pisteen menetelmä on artikkelissa how to check a peptide supplier.