GHK‑Cu vs AHK‑Cu: de två koppartripeptiderna jämförda, atom för atom

Ställ de två sekvenserna bredvid varandra och skillnaden är en enda kolatom.

• GHK = glycyl-L-histidyl-L-lysin. Glycin, den första resten, har ett väte som sidokedja.
• AHK = L-alanyl-L-histidyl-L-lysin. Alanin har en metylgrupp (CH₃) där glycin har ett väte.

Den metylgruppen lägger till 14 Da (CH₂) till massan och introducerar ett kiralt centrum vid den första resten.

Allt annat är identiskt: histidinet i mitten, vars imidazolring är det som binder koppar, och lysinet i slutet. Varje tripeptid komplexeras sedan med en koppar(II)-jon för att ge GHK‑Cu och AHK‑Cu.

GHK isolerades från plasma 1973 av Loren Pickart, vilket är varför det har femtio års kemi bakom sig.

AHK är en syntetisk analog som dök upp i kosmetikingredienslitteraturen på 2000-talet. Båda tillverkas idag genom fastfas-syntes; ingen extraheras från något. Endast för forskning. Inte för humant eller veterinärt bruk.

Kopparinnehållsraden är värd en andra titt. I båda komplexen står en enda kopparatom (63.5 g/mol) för ungefär en sjättedel av massan.

En "100 mg GHK‑Cu" flaska innehåller därför cirka 16 mg koppar och 84 mg peptid; en lista som anger massan för den kopparfria tripeptiden för ett kopparkomplex har räknat fel med 16 %.

Koppar(II)-jonen i GHK‑Cu binds av tre atomer i peptiden: kvävet i den N-terminala aminen (på glycin), det deprotonerade kvävet i den första peptidbindningen och ett kväve i histidinets imidazolring.

En fjärde plats på kopparn upptas av vatten eller, vid högre koncentration, av en andra GHK-molekyl. Geometrin är kvadratisk-planar runt kopparn, vilket är arrangemanget som ger koppar(II)-peptidkomplex deras blåvioletta färg.

AHK‑Cu binder koppar genom samma tre kväven.

Metylgruppen på alanin sitter på kolet bredvid den N-terminala aminen, utanför koordinationsplanet, så den ändrar kopparns omedelbara miljö utan att ändra vilka atomer som binder det. Två konsekvenser är mätbara:

• Färgen är densamma. Båda pulvren är blåvioletta, båda lösningarna är blå. Inget på en bänk skiljer dem åt med blotta ögat.
• Massan är olika. På ett masspektrum uppträder de fria tripeptidjonerna vid 341,2 (GHK, M+H⁺) och 355,2 (AHK, M+H⁺); kopparn dissocieras under vanlig jonisering, så certifikatet rapporterar peptidmassan, och 14 Da-gapet är identitetskontrollen.

Båda komplexen är stabila som torra fasta ämnen men känsliga för syre och ljus under långa perioder i lösning, vilket är varför lagringsraden i båda katalogposterna lägger till "syre" till det vanliga "ljus och fukt".

Eftersom de två ser identiska ut är analyscertifikatet det enda dokument som talar om för en köpare vilket som finns i vialen. Tre rader gör jobbet.

Retentionstid

På en omvänd-fas HPLC-kolonn gör den extra metylgruppen AHK något mer hydrofob, så AHK‑Cu eluerar lite senare än GHK‑Cu under samma gradient.

I sig är den förskjutningen för liten för att identifiera en förening; den blir användbar när laboratoriet har kört båda standarderna, och det är anledningen till att en leverantör som listar båda måste visa ett separat kromatogram för varje.

Massbekräftelse

Den avgörande raden.

En observerad massa som överensstämmer med 340,4 (eller en M+H⁺ vid 341,2) betyder GHK; 354,4 (M+H⁺ vid 355,2) betyder AHK.

Ett certifikat som visar GHK-massan på en AHK‑Cu-vial har testat fel förening, eller vialen innehåller fel förening.

Kopparanalys

De bästa certifikaten lägger till en kopparbestämning (med ICP eller en kolorimetrisk metod) och rapporterar den mot de teoretiska 15 till 16 %.

Ett kopparvärde långt under det betyder att vialen innehåller den fria tripeptiden, eller ett komplex tillverkat med för lite koppar, och den blå färgen blir svagare än förväntat.

Få laboratorier inkluderar denna rad som standard; be om den vid en stor beställning.

OXpeptides certifikat publiceras per lot i COA-biblioteket.

De återstående fälten (laboratorium, verifierbart testnummer, lot, datum, foto av den märkta vialen) är desamma för varje peptid och läses i hur man läser ett peptid-COA; vad HPLC-procenten gör och inte gör står i HPLC-renhet: vad 99 % betyder.

Detta är den största praktiska skillnaden mellan de två reagenserna, och det är ett faktum om dokumentation, inte om molekylerna.

GHK‑Cu har karakteriserats sedan 1973.

Dess kristallstruktur, dess kopparbindningskonstanter, dess beteende i odlade cellmodeller och i genuttrycksskärmar (Broad Institute Connectivity Map, där det förekommer vid namn) är publicerade, granskade och återgranskade.

Pickart och Margolinas 2018-granskning, listad nedan, är den vanliga ingångspunkten.

AHK‑Cu har ett fåtal primära artiklar, de flesta från kosmetikingredienssidan och de flesta i odlade cellmodeller, varav Shin et al. (2019) är den som studerar den vid namn bredvid GHK‑Cu.

Det finns ingen granskning dedikerad till den.

Ett laboratorium som behöver ett reagens med en djup publicerad baslinje väljer GHK‑Cu; ett som studerar analogen själv väljer AHK‑Cu, och beställer vanligtvis båda för att köra dem sida vid sida.

Vad en köpare tar med sig av det: varje lista som beskriver AHK‑Cu med GHK-Cus litteratur lånar. De två föreningarna är en metylgrupp från varandra i struktur och några hundra artiklar från varandra i dokumentation.

Katalogen erbjuder båda som lyofiliserade pulver i förseglade 3 mL borosilikatflaskor med bromobutylseptum och krympkapsyl:

GHK‑Cu kommer i större flaskor eftersom det produceras i industriell skala och kostar mindre per milligram att tillverka; AHK‑Cu är en syntes i mindre volym och börjar på 50 mg.

De aktuella priserna, per flaska och per milligram, finns på de två produktsidorna, och köpsidans frågor (leverantörskontroller, vad priset inkluderar) finns i GHK‑Cu-köpguiden och AHK‑Cu-köpguiden.

"Kopparpeptid" på en marknadsplats kan betyda antingen förening, en blandning av de två, den kopparfria tripeptiden eller en kräm som innehåller en bråkdel av en procent av en av dem. Fyra frågor avgör det:

1. Är sekvensen utskriven? Gly-His-Lys eller Ala-His-Lys. "Kopparpeptid" ensamt är en kategori, inte en förening.
2. Är massan på certifikatet den rätta? 340,4 för GHK, 354,4 för AHK, på en rapport från ett namngivet laboratorium som kan slås upp.
3. Är pulvret blåviolett, och är mängden angiven i milligram? Ett vitt pulver är inte ett kopparkomplex; en lista i fluid ounces är en kosmetika.
4. Beskriver sidan endast reagenset? Sammansättning, renhetsdokumentation, lagring, "endast för forskning". En sida som beskriver något annat är en sida som kan tas ner med en beställning på väg.

Den fullständiga sju-punktsmetoden finns i hur man kontrollerar en peptidleverantör.