Íonacht peiptíde: cad a chiallaíonn "99 %" HPLC ar theastas — agus cad nach ndéanann sé

HPLC — crómatagrafaíocht leachtach ardfheidhmíochta — scarann comhpháirteanna sampla trí thuaslagán de a bhrú trí cholún pacáilte faoi bhrú.

I HPLC droimpholach, an caighdeán do pheiptídí, is é an pacáil cholúin neamhpholach (go hiondúil slabhraí C18 nasctha le sileacáit) agus is é an chéim shoghluaiste uisce le codán méadaithe aicéatóintríle, de ghnáth le 0.1 % aigéad trifluaraicéiteach.

Fágann comhpháirteanna an colún ag amanna éagsúla ag brath ar cé chomh láidir agus a chloíonn siad leis an bpacáil: níos hidreafóbach, níos déanaí.

Ag an asraon, taifeadann brathadóir UV ionsú i gcoinne ama. Ionsúnn peiptídí ag 214–220 nm mar gheall ar a mbannaí peiptíde, agus sin an tonnfhad a úsáidtear.

Is é an taifeadadh an crómatagram: bunlíne le buaiceanna, gach buaic comhpháirt amháin, a limistéar comhréireach le méid an chomhpháirt sin a chuaigh thar an mbrathadóir.

Is cóimheas limistéar é an figiúr íonachta:

íonacht (%) = limistéar na príomh-buaice ÷ suim limistéar na mbuaiceanna go léir × 100

Má dhéanann an phríomh-bhuaic 99.2 % den limistéar iomlán comhtháite, léann an teastas 99.2 %.

Gach rud eile sa lorg — an 0.8 % — is buaiceanna eisíontais iad: móilíní eile a ionsúnn ag an tonnfhad céanna agus a ealaíodh ag amanna eile.

Cinneann trí sonraí an fiúntas atá ag an uimhir sin: thuairiscigh an saotharlann an modh (colún, grádán, tonnfhad), taispeántar an crómatagram lena aiseanna, agus tá an comhtháthú infheicthe — cé na buaiceanna a áiríodh.

Is éileamh é céatadán atá priontáilte ina aonar, gan lorg, ní tomhas.

Déanann caibidil ghinearálta USP ar chrómatagrafaíocht cur síos ar an méid a chuimsíonn modh inbhailithe; leanann teastas tromchúiseach é. Tá conas an chuid eile den doiciméad a léamh i conas teastas peiptíde a léamh.

Deir sé: as an ábhar a ionsúnn UV a tháinig as an gcolún, ealaigh 99 % mar bhuaic amháin. Tá an sampla glan crómatagrafach.

Ní deir sé:

• Gur bhfuil 99 mg peiptíde sa vial in aghaidh 100 mg púdair. Ní bhíonn peiptíd líofailithe riamh glan de réir maise. Tá uisce iarmharach aige (cúpla faoin gcéad), frith-ian fágtha ón bpúirifiú — aicéatáit nó trifluaraicéatáit ceangailte leis na hiarmhair bhunúsacha — agus uaireanta salainn. Ní ionsúnn aon cheann acu seo ag 220 nm, mar sin ní fheictear aon cheann sa chrómatagram. Is tomhas ar leith é codán maise an phríomhpeiptíde ar a dtugtar cion peiptíde glan, a fhaightear trí anailís aimínaigéid nó anailís eiliminteach (nítrigin), agus is gnách go mbíonn sé idir 70 agus 90 % do pheiptídí líofailithe. Déanann figiúr HPLC 99 % agus cion peiptíde glan 80 % cur síos ar an vial céanna gan contrárthacht.
• Gur é an phríomh-bhuaic an comhdhúil ar an lipéad. Tugann seicheamh mícheart, a íonaíodh go maith, buaic ghlan amháin freisin. Is ceist éagsúil í an chéannacht, a fhreagraíonn mais-speictriméadracht.
• Aon rud faoin lot atá agat, mura bhfuil uimhir an lot sin ar an teastas.

Meáionn mais-speictriméadracht an móilín.

Déantar an sampla a ianú (electrospray, ESI, nó MALDI), agus tuairiscíonn an ionstraim cóimheas mais-go-muirir na n-ian; uaidh sin ríomhann an saotharlann an mhais mhóilíneach bhraite agus déanann sé comparáid leis an mais theoiriciúil den chomhdhúil.

Do GHK‑Cu is é an mhais ionchais thart ar 404 Da; do BPC‑157, thart ar 1,419 Da. Deimhníonn comhaontú laistigh de chodán de daltón gur é an phríomh-bhuaic HPLC an peiptíd atá ainmnithe ar an lipéad.

Tugann HPLC gan MS íonacht substainte neamhaithníthe; tugann MS gan HPLC céannacht gan figiúr íonachta. Iompraíonn teastas anailíse an dá líne, ón sampla céanna, ar an tuairisc chéanna.

Níl na buaiceanna beaga timpeall na príomh-buaice mistéireach. Táirgeann sintéis peiptíde ar phas soladach agus an láimhseáil ina dhiaidh sraith seachtháirgí intuartha, agus tá ainm ceimiceach ag gach ceann:

• Seichimh ghiorraithe. Theip ar iarmhar cúpláil le linn sintéise, mar sin tá codán de na slabhraí in easnamh aimínaigéad amháin (seichimh scriosta). Ealaíonn siad gar don phríomh-bhuaic agus is iad an eisíontas is coitianta.
• Slabhraí neamhdhíphróiteáilte go hiomlán. D'fhan grúpa cosanta ón sintéis (t-búitile, trítile) ceangailte. Beagán níos hidreafóbach: ealaíonn níos déanaí.
• Díamidú. Thiontaigh aimíd taobhshlabhra asparagín nó glutamáin go haigéad carbocsaileach. Daltón amháin níos troime; is minic a fheictear é mar ghualainn ar an bpríomh-bhuaic.
• Ocsadú meitiainín. Phioc sulfar iarmhair meitiainín suas ocsaigin (meitiainín sulfocsaíd, +16 Da). Ealaíonn níos luaithe. Tá meitiainín i Semax, agus sin an fáth a seoltar é séalaithe agus fuar.
• Foirmiú aspartaimíde agus racamú. Athshocruithe ag iarmhair aspartáite le linn sintéise; mion, ach sainiúil.
• Déiméirí agus comhiomláin. Dhá shlabhra nasctha, de ghnáth trí cistéin; ealaíonn i bhfad níos déanaí, agus mais dhúbailte ar MS.

Tá saotharlann a thuairiscíonn na buaiceanna seo de réir ainm, nó ar a laghad de réir am coinneála agus limistéir, ag taispeáint a chomhtháthaithe. Níl ceann a thaispeánann uimhir amháin.

Tá an frása le feiceáil ar na mílte liostú.

Léitear go litriúil é mar shonraíocht — "tá sé ar intinn againn 98 % ar a laghad" — ní tomhas ar aon lot.

Gan lorg, modh agus uimhir lot, ní féidir é a sheiceáil, agus tá an t-eolas céanna ag figiúr nach féidir a sheiceáil agus atá ag aon fhigiúr.

Baineann an rud céanna le céatadáin a thugtar gan áit dheachúlach ar gach táirge ó sholáthraí.

Tagann luachanna tomhaiste amach mar 98.7 % nó 99.31 %; catalóg ina léann gach mír "99 %" a clóscríobhadh, ní a tástáladh.

Tá seiceálacha soláthraithe a leanann as seo i cá háit le peiptídí taighde a cheannach sna Stáit Aontaithe.

Tá cás ina bhfuil an líne mais, agus ní an céatadán, an seiceáil céannachta ar fad oibrithe trí GHK‑Cu vs AHK‑Cu, dhá chomhdhúil 14 Da óna chéile.

Tá sampla oibrithe de theastas do chomhdhúil amháin — méideanna, lot, cad a thaispeánann an tuairisc — i an treoir cheannaigh BPC‑157.