GHK‑Cu vs AHK‑Cu: τα δύο χαλκού τριπεπτίδια συγκρινόμενα, άτομο προς άτομο

Αν παρατάξουμε τις δύο αλληλουχίες, η διαφορά είναι ένας μόνο άνθρακας.

• GHK = γλυκυλ-L-ιστιδυλ-L-λυσίνη. Η γλυκίνη, το πρώτο υπόλειμμα, έχει υδρογόνο ως πλευρική αλυσίδα.
• AHK = L-αλανυλ-L-ιστιδυλ-L-λυσίνη. Η αλανίνη έχει μεθυλομάδα (CH₃) όπου η γλυκίνη έχει υδρογόνο.

Αυτή η μεθυλομάδα προσθέτει 14 Da (CH₂) στη μάζα και εισάγει χειρόκεντρο στο πρώτο υπόλειμμα. Όλα τα υπόλοιπα είναι ταυτόσημα: η ιστιδίνη στη μέση, της οποίας ο δακτύλιος ιμιδαζολίου είναι αυτός που δεσμεύει τον χαλκό, και η λυσίνη στο τέλος. Κάθε τριπεπτίδιο σχηματίζει στη συνέχεια σύμπλοκο με ένα ιόν χαλκού(II) για να δώσει GHK‑Cu και AHK‑Cu.

Το GHK απομονώθηκε από πλάσμα το 1973 από τον Loren Pickart, γι’ αυτό έχει πενήντα χρόνια χημείας πίσω του. Το AHK είναι συνθετικό ανάλογο που εμφανίστηκε στη βιβλιογραφία συστατικών καλλυντικών τη δεκαετία του 2000. Και τα δύο παρασκευάζονται σήμερα με σύνθεση στερεάς φάσης· κανένα δεν εξάγεται από κάτι. Χρήση μόνο για έρευνα. Δεν προορίζεται για ανθρώπινη ή κτηνιατρική χρήση.

Η γραμμή περιεκτικότητας σε χαλκό αξίζει δεύτερη ματιά. Σε αμφότερα τα σύμπλοκα ένα άτομο χαλκού (63.5 g/mol) αντιστοιχεί σε περίπου ένα έκτο της μάζας. Ένα φιαλίδιο «100 mg GHK‑Cu» περιέχει επομένως περίπου 16 mg χαλκού και 84 mg πεπτιδίου· μια καταχώριση που αναφέρει τη μάζα του ελεύθερου τριπεπτιδίου για σύμπλοκο χαλκού έχει λάθος υπολογισμό κατά 16 %.

Το ιόν χαλκού(II) στο GHK‑Cu δεσμεύεται από τρία άτομα του πεπτιδίου: το άζωτο της αμινομάδας Ν-τελικού (στη γλυκίνη), το αποπρωτονιωμένο άζωτο του πρώτου πεπτιδικού δεσμού και ένα άζωτο του δακτυλίου ιμιδαζολίου της ιστιδίνης. Μια τέταρτη θέση στον χαλκό καταλαμβάνεται από νερό ή, σε υψηλότερη συγκέντρωση, από δεύτερο μόριο GHK. Η γεωμετρία είναι τετραγωνική-επίπεδη γύρω από τον χαλκό, που είναι η διάταξη που δίνει στα σύμπλοκα πεπτιδίων χαλκού(II) το μπλε-ιώδες χρώμα τους.

Το AHK‑Cu δεσμεύει χαλκό μέσω των ίδιων τριών αζώτων. Η μεθυλομάδα της αλανίνης βρίσκεται στον άνθρακα δίπλα στην αμινομάδα Ν-τελικού, έξω από το επίπεδο συντονισμού, οπότε αλλάζει το άμεσο περιβάλλον του χαλκού χωρίς να αλλάζει ποια άτομα τον δεσμεύουν. Δύο συνέπειες είναι μετρήσιμες:

• Το χρώμα είναι το ίδιο. Και οι δύο σκόνες είναι μπλε-ιώδεις, και τα δύο διαλύματα είναι μπλε. Τίποτα σε πάγκο δεν τα ξεχωρίζει οπτικά.
• Η μάζα είναι διαφορετική. Σε φάσμα μάζας τα ιόντα ελεύθερων τριπεπτιδίων εμφανίζονται στα 341.2 (GHK, M+H⁺) και 355.2 (AHK, M+H⁺)· ο χαλκός διασπάται υπό τον συνήθη ιονισμό, οπότε το πιστοποιητικό αναφέρει τη μάζα του πεπτιδίου και το κενό 14 Da είναι ο έλεγχος ταυτότητας.

Και τα δύο σύμπλοκα είναι σταθερά ως ξηρά στερεά αλλά ευαίσθητα σε οξυγόνο και φως για μεγάλα διαστήματα σε διάλυμα, γι’ αυτό η γραμμή αποθήκευσης και των δύο καταχωρίσεων προσθέτει «οξυγόνο» στα συνήθη «φως και υγρασία».

Επειδή τα δύο φαίνονται πανομοιότυπα, το πιστοποιητικό ανάλυσης είναι το μόνο έγγραφο που λέει σε έναν αγοραστή ποιο βρίσκεται στο φιαλίδιο. Τρεις γραμμές κάνουν τη δουλειά.

Χρόνος κατακράτησης

Σε στήλη HPLC αντίστροφης φάσης η επιπλέον μεθυλομάδα καθιστά το AHK ελαφρώς πιο υδρόφοβο, οπότε το AHK‑Cu εκλούεται λίγο αργότερα από το GHK‑Cu υπό την ίδια κλίση. Από μόνο του, αυτή η μετατόπιση είναι πολύ μικρή για να ταυτοποιήσει μια ένωση· γίνεται χρήσιμη όταν το εργαστήριο έχει τρέξει και τα δύο πρότυπα, και αυτός είναι ο λόγος που ένας προμηθευτής που καταγράφει και τα δύο πρέπει να δείχνει ξεχωριστό χρωματογράφημα για το καθένα.

Επιβεβαίωση μάζας

Η αποφασιστική γραμμή. Μια παρατηρούμενη μάζα συνεπής με 340.4 (ή M+H⁺ στα 341.2) σημαίνει GHK· 354.4 (M+H⁺ στα 355.2) σημαίνει AHK. Ένα πιστοποιητικό που δείχνει τη μάζα GHK σε φιαλίδιο AHK‑Cu έχει ελέγξει τη λάθος ένωση, ή το φιαλίδιο περιέχει τη λάθος ένωση.

Δοκιμασία χαλκού

Τα καλύτερα πιστοποιητικά προσθέτουν προσδιορισμό χαλκού (με ICP ή χρωματομετρική μέθοδο) και τον αναφέρουν έναντι του θεωρητικού 15 έως 16 %. Μια ένδειξη χαλκού πολύ κάτω από αυτό σημαίνει ότι το φιαλίδιο περιέχει το ελεύθερο τριπεπτίδιο, ή ένα σύμπλοκο φτιαγμένο με πολύ λίγο χαλκό, και το μπλε χρώμα θα είναι πιο αδύναμο από το αναμενόμενο. Λίγα εργαστήρια περιλαμβάνουν αυτή τη γραμμή από προεπιλογή· ζητήστε την σε μεγάλη παραγγελία.

Τα πιστοποιητικά της OXpeptides δημοσιεύονται ανά παρτίδα στη βιβλιοθήκη COA. Τα υπόλοιπα πεδία (εργαστήριο, επαληθεύσιμος αριθμός δοκιμής, παρτίδα, ημερομηνία, φωτογραφία του επισημασμένου φιαλιδίου) είναι τα ίδια για κάθε πεπτίδιο και διαβάζονται στο πώς να διαβάσετε ένα COA πεπτιδίου· τι κάνει και τι δεν κάνει το ποσοστό HPLC βρίσκεται στο καθαρότητα HPLC: τι σημαίνει 99 %.

Αυτή είναι η μεγαλύτερη πρακτική διαφορά μεταξύ των δύο αντιδραστηρίων και είναι γεγονός τεκμηρίωσης, όχι μορίων.

GHK‑Cu έχει χαρακτηριστεί από το 1973. Η κρυσταλλική δομή του, οι σταθερές δέσμευσης χαλκού, η συμπεριφορά του σε μοντέλα καλλιεργημένων κυττάρων και σε οθόνες έκφρασης γονιδίων (ο Χάρτης Συνδεσιμότητας του Broad Institute, όπου εμφανίζεται ονομαστικά) έχουν δημοσιευτεί, ανασκοπηθεί και επανανασκοπηθεί. Η ανασκόπηση των Pickart και Margolina του 2018, που αναφέρεται παρακάτω, είναι το τυπικό σημείο εισόδου.

AHK‑Cu έχει λίγες πρωτογενείς εργασίες, οι περισσότερες από την πλευρά συστατικών καλλυντικών και οι περισσότερες σε μοντέλα καλλιεργημένων κυττάρων, από τις οποίες η Shin et al.

(2019) είναι αυτή που το μελετά ονομαστικά μαζί με το GHK‑Cu. Δεν υπάρχει αφιερωμένη ανασκόπηση. Ένα εργαστήριο που χρειάζεται αντιδραστήριο με βαθιά δημοσιευμένη βάση επιλέγει το GHK‑Cu· ένα που μελετά το ίδιο το ανάλογο επιλέγει το AHK‑Cu και συνήθως παραγγέλνει και τα δύο για να τα τρέξει δίπλα δίπλα.

Τι παίρνει ένας αγοραστής από αυτό: κάθε καταχώριση που περιγράφει το AHK‑Cu με τη βιβλιογραφία του GHK‑Cu δανείζεται. Οι δύο ενώσεις απέχουν μία μεθυλομάδα σε δομή και μερικές εκατοντάδες εργασίες σε τεκμηρίωση.

Ο κατάλογος προσφέρει και τα δύο ως λυοφιλοποιημένες σκόνες σε σφραγισμένα φιαλίδια βορσιλικατικού γυαλιού 3 mL με διάφραγμα βρωμοβουτυλίου και πώμα πρεσαρίσματος:

Το GHK‑Cu έρχεται σε μεγαλύτερα φιαλίδια επειδή παράγεται σε βιομηχανική κλίμακα και κοστίζει λιγότερο ανά χιλιοστόγραμμο για την παρασκευή του· το AHK‑Cu είναι σύνθεση μικρότερου όγκου και ξεκινά από 50 mg. Οι τρέχουσες τιμές, ανά φιαλίδιο και ανά χιλιοστόγραμμο, βρίσκονται στις δύο σελίδες προϊόντων, και οι ερωτήσεις από την πλευρά της αγοράς (έλεγχοι προμηθευτών, τι περιλαμβάνει η τιμή) βρίσκονται στον οδηγό αγοράς GHK‑Cu και στον οδηγό αγοράς AHK‑Cu.

«Χαλκού πεπτίδιο» σε αγορά μπορεί να σημαίνει είτε ένωση, μείγμα των δύο, το ελεύθερο τριπεπτίδιο ή κρέμα που περιέχει κλάσμα του ενός τοις εκατό ενός από αυτά. Τέσσερις ερωτήσεις το διευθετούν:

1. Είναι γραμμένη η αλληλουχία; Gly-His-Lys ή Ala-His-Lys. «Χαλκού πεπτίδιο» μόνο του είναι κατηγορία, όχι ένωση.
2. Είναι η μάζα στο πιστοποιητικό η σωστή; 340.4 για GHK, 354.4 για AHK, σε αναφορά από ονομασμένο εργαστήριο που μπορεί να αναζητηθεί.
3. Είναι η σκόνη μπλε-ιώδης και η ποσότητα δηλωμένη σε χιλιοστόγραμμα; Λευκή σκόνη δεν είναι σύμπλοκο χαλκού· καταχώριση σε υγρές ουγγιές είναι καλλυντικό.
4. Περιγράφει η σελίδα μόνο το αντιδραστήριο; Σύσταση, τεκμηρίωση καθαρότητας, αποθήκευση, «χρήση μόνο για έρευνα». Σελίδα που περιγράφει οτιδήποτε άλλο είναι σελίδα που μπορεί να αφαιρεθεί με παραγγελία καθ’ οδόν.

Η πλήρης μέθοδος επτά σημείων βρίσκεται στο πώς να ελέγξετε έναν προμηθευτή πεπτιδίων.