Thymosin alpha-1 (Tα1) peptid: sekvens, levering, COA, størrelser

Thymosin alpha-1 (Tα1) er et peptid på 28 aminosyrer først isoleret i 1977 fra kalvethymus af Allan Goldsteins gruppe, som havde fraktioneret thymiske ekstrakter i et årti.

Det viste sig senere at være N-terminalt fragment af et større protein, prothymosin alpha, og at bære en acetylgruppe på N-terminus, en egenskab der betyder noget på et certifikat.

Samme sekvens er produceret syntetisk siden 1980'erne og er licenseret i flere lande under handelsnavnet Zadaxin.

Det der sælges som thymosin alpha-1 til forskning er det identiske 28-residue acetylerede peptid, fremstillet ved fastfase-syntese, renset ved præparativ HPLC og frysetørret. Kun til forskningsbrug.

Ikke til human eller veterinær brug.

Tre katalogposter bærer ordet "thymosin" eller "thym-", og købere spørger regelmæssigt efter én mens de mener en anden. De er tre forskellige objekter.

Alpha- og beta-thymosinerne er urelaterede sekvenser der tilfældigvis blev isoleret fra samme præparation af samme væv (thymosinfraktion 5, et kalvethymus-ekstrakt først fremstillet i 1960'erne), hvilket er den eneste grund til at de deler et navn.

Thymalin er den rå fraktion de blev isoleret fra.

En liste der beskriver thymosin alpha-1 med egenskaberne af TB‑500, eller der giver thymalin en enkelt molekylmasse, har forvekslet de tre. Det syv-residue peptid har sin egen guide: TB‑500 peptid: sekvens, COA, størrelser.

N-terminale serin af thymosin alpha-1 bærer en acetylgruppe (CH₃CO-), tilføjet under syntese som sidste trin på harpiksen. Det ændrer tre ting et certifikat rapporterer.

• Masse. Acetyl tilføjer 42,0 dalton. Et "thymosin alpha-1" hvis masse rekonstruerer til 3.066,3 i stedet for 3.108,3 var aldrig acetyleret og er des-acetyl-peptidet, et andet molekyle.
• HPLC. Det acetylerede peptid har ingen fri N-terminal amin, så det eluerer lidt senere end des-acetyl-formen på omvendt fase. Ufuldstændig acetylering viser sig som en lille top lige før den hovedtop; et veludført lot viser det under 0,5 %.
• Stabilitet. Uden en fri amin ved N-terminus er peptidet ikke et substrat for aminopeptidaser og gennemgår ikke de N-terminale sidereaktioner (diketopiperazindannelse) der forkorter holdbarheden af nogle sekvenser. På hylden er det et af de bedre opførte peptider af sin størrelse.

Sekvensen indeholder ingen methionin, cystein eller tryptophan, så oxidation er ikke bekymringen det er for sermorelin.

Dets ni sure rester gør det stærkt hygroskopisk som acetatsalt, hvilket er grunden til at et forseglet hætteglas betyder mere for dette peptid end for de fleste.

HPLC-renhed: én hovedtop

På omvendt-fase HPLC eluerer peptidet som en enkelt hovedtop; renhedstallet er arealet af den top mod alle toppe. Over 99 % er specifikationen for katalog-lots.

Urenhederne at se efter er des-acetyl-peptidet (eluerer lige før), deletionssekvenser fra syntese (en kæde der mangler én rest) og, for et peptid med så mange glutamat- og aspartat-rester, aspartimid-relaterede biprodukter der eluerer tæt på hovedtoppen.

Massespektrometri: 3.108,3

Et peptid af denne størrelse og ladning ses ved elektrospray-ionisering som multipelt ladede ioner, i negativ mode lige så let som i positiv; rapporten lister de observerede ioner og den dekonvoluerede masse.

For thymosin alpha-1 er de forventede værdier i positiv mode ca. m/z 1.037,1 for [M+3H]³⁺ og 778,1 for [M+4H]⁴⁺, begge rekonstruerende til 3.108,3. En dekonvolueret 3.066 er des-acetyl-formen.

Net peptidindhold, vand, endotoxin

Netindhold (ved aminosyreanalyse eller UV) fortæller hvor mange af de mærkede milligram der er peptid; med kun fire basiske rester til at bære acetat-modioner er 85 til 90 % typisk for denne sekvens, højere end for et basisk peptid.

Vand (Karl Fischer) er typisk 3 til 8 % i en lyofiliseret kage og stiger hurtigt i et åbnet hætteglas af dette hygroskopiske salt. Endotoxin (LAL, i EU/mg) siger om vandet og glasvaren ved fyldningen var rene.

Hvad ellers skal være på siden

• Laboratoriets navn og et verificerbart testnummer (Janoshik Analytical er referencen på dette marked).
• Lotnummeret, identisk med det trykte på hætteglasset.
• Testdatoen og et fotografi af det testede hætteglas med leverandørens etiket. Et certifikat for et bart producent-hætteglas siger intet om det færdige produkt.

OXpeptides-certifikaterne publiceres per lot i COA-biblioteket og på thymosin alpha-1 produktsiden når hvert lot vender tilbage fra laboratoriet. Felt-for-felt-metoden er i sådan læser du et peptid-COA.

Thymosin alpha-1 er på lager i én størrelse, 10 mg: 10 mg af et 3,1 kDa peptid er 3,2 mikromol.

Katalogkortet øverst på denne side viser den aktuelle pris. Volumenrabatter gælder fra to hætteglas (−5 % fra 2, −8 % fra 3), og abonnementsprisen gælder ved hver levering.

Hvad prisen inkluderer hos OXpeptides: et forseglet, etiketteret hætteglas fra et testet lot, dets batch-COA, og en erstatning hvis pakken ankommer tabt eller beskadiget. Leveret fra Frankrig (EU), sporet: $19, gratis fra $150.

Se thymosin alpha-1 i kataloget →

• Temperatur: −20 °C til langtidsopbevaring; et køleskab (2 til 8 °C) i nogle uger.
• Fugt: det punkt at passe på for dette peptid. Ni sure rester gør acetatsaltet stærkt hygroskopisk; hold hætteglasset forseglet og i sin æske, og lad et koldt hætteglas nå rumtemperatur før det forlader sin pose så der ikke kondenserer vand på glasset.
• Lys og ilt: ingen oxiderbar rest i sekvensen; den sædvanlige lukkede æske er nok.
• Holdbarhed: 24 måneder for et forseglet lyofiliseret hætteglas opbevaret koldt; datoen på etiketten gælder.

Nogle dage med omgivende forsendelse nedbryder ikke det forseglede pulver. Reglerne forbindelse for forbindelse er i lyofiliserede peptider: opbevaring og holdbarhed.

"Thymosin alpha 1" returnerer encyklopædiske sider, tidsskriftsartikler og klinikker før det returnerer en forskningsleverandør.

For et laboratorium der har brug for reagenset, er listen der betyder noget svarer på fem spørgsmål på siden selv.

1. Er det det rigtige molekyle? 28 rester, acetyleret, 3.108,3 g/mol. Ikke TB‑500 (889), ikke thymalin (en blanding).
2. Er der et batch-COA fra et navngivet uafhængigt laboratorium, verificerbart på laboratoriets site, med HPLC-renhed, massen på 3.108,3 og net peptidindhold?
3. Viser COA leverandørens eget etiketterede hætteglas, og matcher dets lotnummer det hætteglas du modtager?
4. Sendes hætteglasset fra indenlandsk lager, sporet, på få dage? Kataloget sender fra Frankrig til Europa.
5. Beskriver siden kun reagenset (sekvens, renhedsdokumentation, opbevaring), med "kun til forskningsbrug" angivet tydeligt? En leverandør der publicerer brugsindhold er en leverandør der er let at lukke ned, og den risiko lander på køberen hvis pakke er i transit.

Den syv-punkts metode er i sådan tjekker du en peptidleverandør; den US-dækkende tjekliste i hvor man køber forskningspetider i USA.