GHK‑Cu срещу AHK‑Cu: сравнение на двата медни трипептида атом по атом

При подреждане на двете последователности разликата е един въглероден атом.

• GHK = глицил-L-хистидил-L-лизин. Глицинът, първата аминокиселина, има водород като странична верига.
• AHK = L-аланил-L-хистидил-L-лизин. Аланинът има метилова група (CH₃) там, където глицинът има водород.

Тази метилова група добавя 14 Da (CH₂) към масата и въвежда хирален център при първата аминокиселина. Всичко останало е идентично: хистидинът в средата, чиято имидазолова пръстенова структура свързва медта, и лизинът в края. Всеки трипептид се комплексира с един йон мед(II), за да се получи GHK‑Cu и AHK‑Cu.

GHK е изолиран от плазма през 1973 г. от Loren Pickart, поради което има петдесет години химия зад себе си.

AHK е синтетичен аналог, появил се в литературата за козметични съставки през 2000-те. И двата се произвеждат днес чрез твърдофазен синтез; нито един не се извлича от нещо. Само за изследователски цели. Не за употреба при хора или животни.

Редът за съдържанието на мед заслужава второ внимание. В двата комплекса един атом мед (63.5 g/mol) представлява около една шеста от масата. Флакон „100 mg GHK‑Cu“ следователно съдържа около 16 mg мед и 84 mg пептид; списък, който посочва масата на трипептида без мед за меден комплекс, е сбъркал с 16 %.

Йонът мед(II) в GHK‑Cu се свързва от три атома на пептида: азота на N-крайната аминогрупа (на глицина), депротонирания азот на първата пептидна връзка и азот от имидазоловия пръстен на хистидина. Четвърто място на медта се заема от вода или, при по-висока концентрация, от втора молекула GHK. Геометрията е квадратнопланарна около медта, което е подредбата, даваща на медните(II) пептидни комплекси синьо-виолетовия им цвят.

AHK‑Cu свързва медта чрез същите три азота. Метиловата група на аланина стои на въглерода до N-крайната аминогрупа, извън координационната равнина, така че променя непосредствената среда на медта, без да променя кои атоми го свързват. Две последици са измерими:

• Цветът е същият. И двата праха са синьо-виолетови, и двата разтвора са сини. Нищо на работната маса не ги различава на око.
• Масата е различна. На масов спектър свободните трипептидни йони се появяват при 341.2 (GHK, M+H⁺) и 355.2 (AHK, M+H⁺); медта се дисоциира при обичайната йонизация, така че сертификатът отчита масата на пептида и разликата от 14 Da е проверката за идентичност.

И двата комплекса са стабилни като сухи твърди вещества, но чувствителни към кислород и светлина за дълги периоди в разтвор, поради което редът за съхранение в двата записа в каталога добавя „кислород“ към обичайните „светлина и влага“.

Тъй като двата изглеждат идентични, сертификатът за анализ е единственият документ, който казва на купувача кой е във флакона. Три реда вършат работата.

Време на задържане

На колона с обратна фаза HPLC допълнителната метилова група прави AHK леко по-хидрофобен, така че AHK‑Cu се елуира малко по-късно от GHK‑Cu при същия градиент. Сама по себе си тази промяна е твърде малка, за да идентифицира съединение; става полезна, когато лабораторията е пуснала и двата стандарта, и това е причината доставчик, който предлага и двата, да показва отделна хроматограма за всеки.

Потвърждение на масата

Решаващият ред. Наблюдавана маса, съответстваща на 340.4 (или M+H⁺ при 341.2), означава GHK; 354.4 (M+H⁺ при 355.2) означава AHK. Сертификат, който показва масата на GHK на флакон AHK‑Cu, е тествал грешното съединение или флаконът съдържа грешното съединение.

Анализ на медта

Най-добрите сертификати добавят определяне на медта (чрез ICP или колориметричен метод) и го отчитат спрямо теоретичните 15 до 16 %. Отчитане на медта далеч под това означава, че флаконът съдържа свободния трипептид или комплекс, направен с твърде малко мед, и синият цвят ще бъде по-слаб от очакваното. Малко лаборатории включват този ред по подразбиране; поискайте го при голяма поръчка.

Сертификатите на OXpeptides се публикуват за всеки лот в библиотеката с COA. Останалите полета (лаборатория, проверим номер на теста, лот, дата, снимка на етикетирания флакон) са едни и същи за всеки пептид и се четат в как да се чете COA на пептид; какво казва и какво не казва процентът от HPLC е в HPLC чистота: какво означава 99 %.

Това е най-голямата практическа разлика между двата реагента и е факт за документацията, а не за молекулите.

GHK‑Cu е характеризиран от 1973 г. Кристалната му структура, константите му за свързване с медта, поведението му в модели с култивирани клетки и в скрининги за генна експресия (Connectivity Map на Broad Institute, където се появява по име) са публикувани, рецензирани и преразгледани. Ревюто на Pickart и Margolina от 2018 г., посочено по-долу, е стандартната входна точка.

AHK‑Cu има няколко основни статии, повечето от страната на козметичните съставки и повечето в модели с култивирани клетки, от които Shin et al.

(2019) е тази, която го изучава по име заедно с GHK‑Cu. Няма ревю, посветено на него. Лаборатория, която се нуждае от реагент с дълбока публикувана база, избира GHK‑Cu; такава, която изучава самия аналог, избира AHK‑Cu и обикновено поръчва и двата, за да ги пусне един до друг.

Какво взема купувачът от това: всеки списък, който описва AHK‑Cu с литературата на GHK‑Cu, заема. Двете съединения са на една метилова група разстояние по структура и на няколкостотин статии разстояние по документация.

Каталогът предлага и двата като лиофилизирани прахове в запечатани 3 mL боросиликатни флакони с бромобутилова преграда и капачка с кримп:

GHK‑Cu идва в по-големи флакони, защото се произвежда в индустриален мащаб и струва по-малко на милиграм за производство; AHK‑Cu е синтез с по-малък обем и започва от 50 mg. Актуалните цени, на флакон и на милиграм, са на двете продуктови страници, а въпросите от страна на купувача (проверки на доставчика, какво включва цената) са в ръководството за покупка на GHK‑Cu и ръководството за покупка на AHK‑Cu.

„Меден пептид“ на пазар може да означава или съединение, смес от двете, трипептида без мед или крем, съдържащ част от процента от едно от тях. Четири въпроса го уреждат:

1. Написана ли е последователността? Gly-His-Lys или Ala-His-Lys. „Меден пептид“ сам по себе си е категория, а не съединение.
2. Масата в сертификата правилната ли е? 340.4 за GHK, 354.4 за AHK, в доклад от именувана лаборатория, която може да се провери.
3. Прахът синьо-виолетов ли е и количеството посочено ли е в милиграми? Белият прах не е меден комплекс; списък във флуидни унции е козметика.
4. Описва ли страницата само реагента? Състав, документация за чистота, съхранение, „само за изследователски цели“. Страница, която описва нещо друго, е страница, която може да бъде свалена с поръчка в транзит.

Пълният седемточков метод е в как да се провери доставчик на пептиди.